AAV 실험에서 흔히 나타나는 현상과 원인 및 해결 방법

1) 형광 신호가 거의 관찰되지 않는 경우

가능한 원인:

• 세로타입과 세포 유형의 불일치
• 프로모터가 표적 세포에서 비활성 또는 효율 낮음
• 바이러스 활성 저하 (반복적인 동결-해동 등)

해결 방법:

• 적합한 AAV 세로타입으로 변경
• CAG, EF1α, hSyn 등 프로모터 재검토
• 바이러스 활성 확인 및 동결-해동 횟수 최소화

2) 양성률은 낮지만 양성 세포의 형광이 매우 강한 경우

가능한 원인:

• 세포 내 도입 효율이 낮음 (transduction efficiency 부족)

해결 방법:

• MOI 증가
• 감염 조건(노출 시간, 세포 상태 등) 최적화
• 캡시드(serotype) 변경을 통한 감염 효율 개선

3) 양성률은 높지만 발현 수준이 낮은 경우

가능한 원인:

• 프로모터 활성이 약함
• 발현 카세트 설계 최적화 부족

해결 방법:

• 더 강한 프로모터로 교체
• WPRE, polyA, Kozak 서열 등 발현 요소 최적화
• 삽입 유전자 서열이 발현에 미치는 영향 점검

4) 배치 간 결과 차이가 큰 경우

가능한 원인:

• 바이러스 품질 편차
• titer 측정 방법의 불일치

해결 방법:

• 동일 배치 바이러스 사용 권장
• genome titer와 functional titer를 함께 평가
• 내부 기준 컨트롤 시스템 구축

5) 세포 독성이 심하거나 세포 사멸이 많은 경우

가능한 원인:

• MOI 과다
• 바이러스 정제 불순물 잔존
• 트랜스진 자체의 독성

해결 방법:

• MOI 감소
• 고순도 바이러스 배치 사용
• empty vector 또는 negative control 설정

6) in vitro에서는 잘 되지만 in vivo에서는 효과가 낮은 경우

가능한 원인:

• 조직 장벽에 의한 전달 제한
• 면역 반응에 의한 제거
• 비적절한 투여 경로

해결 방법:

• 투여 방식 최적화 (정맥주사, 국소 주입, 정위 주입 등)
• in vivo 적합성이 높은 세로타입 선택
• 면역 요인 고려

7) in vivo에서 간 발현이 과도하게 나타나는 경우

가능한 원인:

• 전신 투여로 인한 간 축적

해결 방법:

• 조직 특이적 프로모터 사용
• miRNA 타겟 서열을 통한 off-target 억제
• 국소 투여 전략 적용