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AAV Packaging – Research Grade

  • 미니프렙(Miniprep) 단계부터 정제된 AAV 바이러스 인도까지 최소 12일 만에 완료되는 빠른 배송
  • 신뢰할 수 있는 실험 결과를 보장하는 고순도, 낮은 엔도톡신(Endotoxin) 레벨 및 최소화된 빈 캡시드(Empty Capsid) 비율
  • 50,000건 이상의 성공적인 프로젝트 수행 실적으로 검증된 100개 이상의 혈청형(Serotypes) 선택 옵션 및 전문가 기술 지원

Overview

아데노 부속 바이러스(AAV) 소개 – 유전자 치료제 연구의 골드 스탠더드(Gold Standard)인 이유

아데노 부속 바이러스(AAV)는 비병원성 단일 가닥 DNA 바이러스로, 탁월한 연구 도구이자 유전자 및 세포 치료 분야에서 유전적 페이로드(Payload)를 전달하는 대표적인 매개체로 자리 잡았습니다. 학계와 산업계 연구자 모두가 AAV를 가장 선호하는 벡터로 선택하는 데에는 다음과 같은 주요 특징들이 기여하고 있습니다.

  • 비병원성 안전성: AAV는 현재 인간에게 어떠한 질병도 유발하지 않는 것으로 알려져 있어, 체내(in vivo) 및 체외(in vitro) 유전자 전달을 위한 가장 이상적인 선택지입니다.
  • 낮은 면역원성: AAV 감염은 매우 경미한 수준의 면역 반응만을 유도하므로, 연구용 및 임상용 모두에서 고용량 투여가 가능하며 장기적인 유전자 발현을 지원하고 표적 외 효과(Off-target effects)를 최소화합니다.
  • 광범위한 세포 친화성(Tropism): 바이러스 벡터 중에서도 독특하게, AAV는 분열 세포와 비분열 세포 모두를 효율적으로 감염시킬 수 있어 다양한 조직 및 세포 유형에 걸쳐 활용 범위를 크게 넓혀줍니다.
  • 안정적이고 지속적인 발현: 재조합 AAV 벡터는 표적 유전자(GOI)를 숙주 게놈에 삽입하지 않고도 장기적인 유전자 발현을 유도하므로, 게놈 삽입으로 인한 안전성 우려를 최소화하는 동시에 지속적인 치료 효과를 가능하게 합니다.
  • 혈청형(Serotype)에 따른 표적 특이성: 각 AAV 혈청형의 캡시드(Capsid) 구조 차이는 숙주 세포 유형별 감염률의 차이를 만들어내며, 이를 통해 유전자 치료 및 연구 목적에 맞춰 특정 조직이나 세포 유형을 정밀하게 표적화할 수 있습니다.

  • 아데노부속바이러스(AAV)는 비병원성 single-stranded DNA 바이러스로, 여러 가지 특성 덕분에 우수한 연구 도구일 뿐만 아니라 유전자 및 세포 치료에서 유전물질 전달 벡터로도 매우 유력한 후보입니다. AAV의 주요 특성은 다음과 같습니다:

    AAV는 현재까지 알려진 어떤 질병도 유발하지 않으며,

    AAV 감염은 매우 약한 면역 반응만을 유도하고,

    분열 세포와 비분열 세포 모두를 감염시킬 수 있으며,

    재조합 AAV(rAAV)는 숙주 게놈에 유전자를 삽입하지 않고도 목적 유전자의 장기간 발현을 유도할 수 있습니다.

    또한, 다양한 AAV serotype의 캡시드 구조 차이는 특정 세포 유형에 대한 감염률에 영향을 주며, 이를 통해 조직 또는 세포 유형 특이적인 감염 타겟팅이 가능합니다.

    PackGene은 귀하의 AAV 기반 연구를 지원하기 위해 최고 품질의 AAV 패키징 서비스를 제공합니다. 저희는 AAV 생산 효율(titer, 순도, 활성도 및 일관성)을 획기적으로 향상시키는 일련의 독자적인 기술을 개발하였습니다.

    다양한 연구 목적에 맞추어 여러 serotype을 제공하며, 빠른 납기와 합리적인 가격을 유지하면서도 최고의 품질을 보장하기 위해 노력하고 있습니다. 당사는 명시된 리드타임 내에 보장된 수량의 AAV를 납품할 것을 약속드립니다. 만약 보장된 수량과 효율이 충족되지 않을 경우, 전체 주문 금액의 5%를 다음 주문에 사용할 수 있는 계정 크레딧으로 환불해드립니다.

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장점

  • 빠른 제작

    AAV 5E+13GC 기준 12~15영업일 소요

  • 보장된 titer

    ≥1E+13GC/mL (qPCR 유전체 복제 수/mL)

  • 고순도

    SDS-PAGE 분석을 통해 검증

  • 고수율

    최대 1E+16 GC

  • 낮은 내독소 함량

    <10EU/ml, 생체 내 실험에 적합

  • 낮은 empty 캡시드

    <30%

  • 다양한 혈청형

    70개 이상의 다양한 혈청형 옵션 제공

  • 풍부한 경험

    10,000건 이상의 맞춤형 AAV 프로젝트를 성공적으로 수행

  • 숙련된 기술 지원

    수년간의 AAV 경험을 보유한 전문가 팀

서비스 상세 내용

가격과 제작기간

*유전자 시퀀스 싸이즈가 패키징 용량(4.7 kb)을 초과하거나 editing한 rep/cap 플라스미드 또는 헬퍼 플라스미드로 패키징을 진행할 경우 titer을 보장드리지 않습니다.

AAV Packaging Serotypes Guarantoed Yield (GC)* 제작기간(영업일 기준)
Normal-yield AAV Serotypes 2E+12 GC 12-15 Days
5E+12 GC
1E+13 GC
2E+13 GC
5E+13 GC
1E+14 GC
2E+14 GC 18-24 Days
5E+14 GC
1E+15 GC 30-45 Days
2E+15 GC
 Low-yield AAV Serotypes (AAV4, 6, etc.) 2E+12 GC 12-15 Days
5E+12 GC
1E+13 GC
2E+13 GC
5E+13 GC
1E+14 GC 18-24 Days
2E+14 GC
4E+14 GC
  • GC = Genome copies.
  • 생산 데이터가 부족한  AAV 혈청형의 경우, 최종 수율이나 titer을 보장할 수 없습니다.
  • 현재 특허가 등록된 AAV 혈청형을 상업적 목적으로 사용하고자 하는 경우, 사전에 특허 소유자에게 연락하여 사용 승인을 받는 것을 추천드립니다.

 

보관 방법:

  • 바이러스는 -80°C에 보관하고, 작업 시에는 얼음위에서 진행하십시오.
  • 필요한 사용량을 사전에 계산하여 PackGene에 알려주시면, 귀하가 지정한 요구 사항에 따라 바이러스를 소분해 드립니다. 이는 귀하가 AAV를 수신한 후 불필요한 해동과 재동결을 방지하여 바이러스 생존도에 영향을 미치는 동결-해동 사이클을 최소화하는 데 도움이 됩니다. 소분이 필요한 경우, 실리콘 처리된 내벽의 PCR 튜브또는 단백질 결합율이 낮은 특수 바이러스 보존 튜브를 사용하는 것이 좋습니다..
  • 사용 직전에 바이러스 소분을 아이스 배스(ice bath)에서 해동하십시오.
  • 필요한 경우 PBS 또는 PBS / 0.001% F-68로 희석하십시오.

Quality Control

PackGene의 QC전문가팀에서 다양한 AAV 기반 품질 분석법을 개발하였습니다. 해당 QC 테스트는 in vitro 및 in vivo 연구용 AAV 바이러스 입자의 완전성, 순도, titer을 확인하는 것을 목표로 합니다. AAV genome copy 수는 ATCC의 Reference AAV를 titer 보정 기준으로 사용하는 SYBR Green qPCR 법으로 정량합니다. 순도는 Coomassie-Blue 염색법을 통해 확인됩니다.

저희는 AAV 의 내독소 수준이 10 EU/ml 미만이 되도록 보장합니다. 또한 ddPCR, TEM, TCID50 역가 측정을 비롯한 추가 QC 테스트 및 기타 품질 관리 서비스를 제공합니다. 보다 자세한 내용은 AAV 분석 서비스 페이지를 참조해 주십시오.

Category QC Assays QC Standard
Identity Identity – GOI Sequence Additional QC
Purity SDS-PAGE Coomassie Blue Staining Free QC
TEM Additional QC
AUC Additional QC
Potency & Content qPCR Free QC
ddPCR Additional QC
TCID50 Additional QC
Capsid Titer-ELISA Additional QC
Impurity Endotoxin Test Free QC
Mycoplasma Detection Additional QC
Sterility Test Additional QC
Residual Plasmid Test Additional QC

품질

  • Standard QC

    • Restriction digestion analysis로 AAV패키징에 사용할 plasmid의 정확성을 분석합니다.
    • qPCR로 AAV의 titer을 측정. (SYBR Green with standard curve for quantification)
    ATCC VR-1816™ was used as the standards for AAV qPCR titering
    Note: ATCC VR-1816™ was used as the standards for AAV qPCR titering.
    • LAL assay 방법으로 Endotoxin 측정
    • SDS-PAGE 와 Coomassie 염색법으로 AAV 순도를 측정

    Lanes 2-5 and 7-1: AAV samples produced at PackGene. Lane 1,6: Marker
    Legend: Lanes 2-5 and 7-1: AAV samples produced at PackGene. Lane 1,6: Marker

  • Other Available Analytical Tests

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