FAQ

동결·해동, 증발 및 튜브 벽면 흡착으로 인한 시료 손실을 방지하기 위해 1회 위탁 배송 시 최소 50 μL 이상의 검체 발송을 권장합니다.

세부 항목별 권장 검체량은 유전체 역가(Genome Titer), 플라스미드 DNA 잔류량(Plasmid DNA residue), rcAAV 등의 경우 10 μL 이상이며, 감염 역가(Infection Titer)는 20 μL 이상, 빈 캡시드 비율 분석(Empty Capsid Rate)은 5E+13 vg입니다.

일반적인 생화학적 분석법의 상대표준편차(%RSD)는 대개 15%~25% 수준이며, ddPCR의 일반 허용 기준은 10%입니다. PackGene의 내부 QC 검증 데이터에 따르면, ddPCR의 %RSD는 대부분 5% 미만으로 관리되며, TCID50의 %RSD 역시 10% 미만으로 엄격하게 유지되고 있습니다.

PackGene의 AAV Fast 서비스를 통해 생산된 수확액(Harvest liquid)은 프로젝트의 특성을 평가한 후 필요에 따라 광범위한 외래성 바이러스 인자(Exogenous viral elements) 검사를 진행합니다. AAV Fast 서비스의 초기 수확액 및 최종 납품물 모두 이러한 외래 바이러스 인자가 검출되지 않는 안전한 상태(무검출)로 제공됩니다.

Yes.

AAV Fast Service의 예상 빈 캡시드 비율(Empty capsid rate)은 AAV 혈청형(Serotype)에 따라 차이가 있습니다. 대표적인 예로, PackGene의 AAV Fast Service를 통해 생산된 AAV9의 예상 빈 캡시드 비율은 10% 미만으로 관리됩니다.

바이러스의 빈 캡시드 비율(Empty capsid rate)은 음이온 교환 크로마토그래피(AEX-HPLC), 분석용 초원심분리(AUC), 투과전자현미경(TEM), 저온투과전자현미경(Cryo-TEM), VG/Capsid Titer 비율 등 다양한 기법을 통해 측정할 수 있습니다. 다만 AUC, TEM, Cryo-TEM은 통상 정량적인 품질 관리(QC) 목적에는 적합하지 않으므로, PackGene에서는 음이온 교환 크로마토그래피(HPLC)를 빈 캡시드 비율 분석의 표준 시험법으로 채택하고 있습니다. 아울러 AEX-HPLC 분석 결과에 대한 2차 교차 검증이 필요한 경우 Cryo-TEM 및 AUC 추가 분석 서비스도 함께 제공해 드립니다.

초기 연구개발(Early development) 단계에서는 공통 벡터 서열(Common vector elements)을 표적하는 프라이머를 사용하여 mL당 유전체 복제수(GC/mL)를 측정할 수 있습니다. 따라서 이 단계에서는 일반적으로 polyA 서열이나 ITR과 같은 공통 서열을 활용하여 GC/mL를 산출합니다. 다만, GMP 제품의 유전체 역가(GC) 시험에서는 AAV 벡터 내 도입유전자(Transgene)를 표적으로 하는 특이적 프라이머를 사용하는 것을 권장합니다. 당사의 AAV Fast Service 최종 역가 시험 역시 도입유전자 특이적 프라이머(Transgene-specific primer)를 사용하도록 설계되어 있습니다.

대부분의 경우 mL당 유전체 복제수(GC/mL)와 mL당 바이러스 유전체수(vg/mL)는 상호 호환 가능한 동의어로 동일하게 간주됩니다. PackGene에서는 qPCR과 ddPCR(미적분 디지털 PCR) 두 가지 방식을 모두 활용하여 GC를 측정할 수 있습니다. qPCR 시험은 표준 검량선(Calibration standard) 물질이 필요하지만, ddPCR은 참조 표준품을 선택적으로 활용할 수 있습니다. qPCR 방식은 실험실 간 및 작업자 간 변수의 영향을 상대적으로 받기 쉬운 반면, ddPCR은 전반적으로 더 낮은 %RSD로 우수한 정밀도를 나타냅니다. 따라서 공정 개발 탐색 단계 및 중간 공정 산물(Intermediate products)의 GC 측정에는 주로 qPCR을 적용하고, 최종 완제(Final products)의 GC 측정에는 ddPCR을 주로 적용하고 있습니다.