AAV 발현 벡터의 기본 구성

AAV 벡터는 일반적으로 재조합 아데노연관바이러스(recombinant AAV, rAAV) 발현 벡터를 의미하며, 다음과 같은 요소로 구성된다.

1. ITR (Inverted Terminal Repeats)

발현 카세트 양쪽 말단에 위치하며, AAV 게놈에서 유일하게 필수적인 시스 작용 요소(cis-element)로서, 바이러스 게놈의 복제 및 패키징에 필수적이다. rAAV에서는 일반적으로 ITR만 유지되고, 바이러스 유전자는 제거된다.

2. 프로모터 (Promoter)

목적 유전자의 발현을 유도한다.

• 범용 프로모터: CMV, CAG (CMV enhancer + chicken β-actin promoter), EF1α
• 조직 특이적 프로모터: hSyn(신경세포), GFAP(성상세포), TBG(간)

3. 목적 유전자 (GOI)

치료 유전자, GFP, Cre, shRNA/sgRNA 등 발현을 원하는 유전자. rAAV는 주로 에피좀(episome) 형태로 존재하며, 숙주 게놈에의 통합은 제한적이다.

4. PolyA 신호

SV40 polyA 또는 bGH polyA 등이 사용되며, 전사 종료 및 mRNA 안정성 향상에 기여한다.

5. 발현 강화 요소 (선택적)

• Enhancer / Intron: 전사 효율 증가
• WPRE: 전사 후 조절을 통해 발현 증가 (안전 변이형 사용 권장)
• Kozak 서열: 번역 개시 효율 증가

6. 태그 및 다중 유전자 발현 요소

• 태그: FLAG, HA, His 등
• 다중 발현 전략: 2A peptide (효율 높음) 또는 IRES (효율 낮음)

패키징 관련 요소 (발현 카세트 외)

AAV 생산 시 추가적으로 필요:

Rep/Cap 유전자

• Rep: 복제 관련
• Cap: 캡시드 단백질 (혈청형 결정, 예: AAV2, AAV9)

Helper 유전자

• 주로 아데노바이러스 유래로 복제 보조 기능 제공

이들은 최종 AAV 입자에는 일반적으로 포함되지 않는다.

AAV 발현 벡터의 기본 구조:ITR – Promoter – GOI – PolyA – ITR