AAV(아데노연관바이러스)를 이용한 실험에서는 흔히 한 가지 지표에 많은 관심을 갖게 됩니다.

바로 AAV 바이러스 역가(titer)가 충분히 높은가입니다.

그러다 보니 다음과 같이 생각하기 쉽습니다.

“AAV는 역가가 높을수록 품질이 좋은 것이다.”

하지만 반드시 그런 것은 아닙니다.

AAV 역가가 높다는 것은 검출되는 벡터 게놈 또는 캡시드의 양이 많다는 것을 의미할 수 있지만, 높은 역가가 곧 높은 품질이나 우수한 생물학적 활성을 의미하는 것은 아닙니다.

AAV 품질을 평가할 때는 역가뿐만 아니라 캡시드 구성, 벡터 게놈의 완전성, 순도, 기능적 활성 등을 종합적으로 확인해야 합니다.

1. 먼저 확인해야 할 것은 “어떤 역가인가?”입니다

AAV 분석에서 흔히 사용되는 지표로는 벡터 게놈 역가(vector genome titer, VG titer)와 캡시드 역가(capsid titer)가 있습니다.

VG 역가는 시료에 존재하는 벡터 게놈의 양을 나타내며, 일반적으로 vg/mL 또는 GC/mL 등의 단위로 표시됩니다.

반면 캡시드 역가는 AAV 캡시드 입자의 양을 나타냅니다.

여기서 중요한 점은,

“캡시드가 많다 = 완전한 AAV 입자가 많다”는 의미가 아니라는 것입니다.

AAV 생산 과정에서는 목표 벡터 게놈을 포함하는 입자뿐만 아니라, 게놈이 들어 있지 않은 empty capsid나 불완전한 게놈을 포함하는 partial capsid 등이 존재할 수 있습니다.

따라서 “1×10¹³ vg/mL”와 같은 숫자 하나만으로 AAV의 전체적인 품질을 판단해서는 안 됩니다.

2. 왜 ‘고역가 = 고품질’이라고 할 수 없을까요?

완전한 벡터 게놈을 가진 입자의 비율도 중요합니다

AAV 생산 과정에서 모든 캡시드가 목표 벡터 게놈을 정확하게 패키징하는 것은 아닙니다.

최종 AAV 시료에는 다음과 같은 입자가 포함될 수 있습니다.

• Full capsid: 목표 벡터 게놈을 포함하는 입자
• Empty capsid: 벡터 게놈을 포함하지 않는 입자
• Partial capsid: 불완전한 벡터 게놈 등을 포함하는 입자

따라서 단순히 “입자 수가 많다” 또는 “VG 역가가 높다”는 이유만으로 AAV 제품의 품질이 높다고 판단하기는 어렵습니다.

AAV를 평가할 때는 어떤 입자가 포함되어 있는지, 그리고 벡터 게놈이 적절한 상태로 존재하는지를 함께 확인하는 것이 중요합니다.

3. 역가가 높더라도 Full/Empty 비율을 확인해야 합니다

예를 들어 두 개의 AAV 로트가 있다고 가정해 보겠습니다.

A 로트:
VG 역가는 높지만 empty capsid나 partial capsid 등이 상대적으로 많습니다.

B 로트:
VG 역가는 A 로트보다 조금 낮지만 입자 구성, 순도, 벡터 게놈 완전성 등이 양호합니다.

이 경우 단순히 “A 로트의 역가가 더 높으므로 품질도 더 좋다”고 판단할 수는 없습니다.

AAV에서는 단순히

“얼마나 많은가?”

뿐만 아니라,

“무엇이 들어 있는가?”

를 함께 보는 것이 중요하기 때문입니다.

4. AAV 역가는 검출 방법에 따라서도 달라질 수 있습니다

AAV 역가는 측정 방법과 시료 전처리 조건 등에 따라 결과가 달라질 수 있습니다.

예를 들어,

• qPCR과 ddPCR은 측정 원리가 다름
• 사용하는 primer/probe의 위치가 다름
• 시료 전처리 조건이 다름
• 검출 대상 영역이 다름
• 시료의 불순물이나 매트릭스가 측정에 영향을 줄 가능성이 있음

등의 요인이 있습니다.

따라서 서로 다른 분석 방법으로 얻은 AAV 역가를 단순하게 비교하는 것은 주의해야 합니다.

특히 AAV 로트 간 비교에서는 가능한 한 동일한 분석법과 전처리 조건을 사용하고, 재현성이 확보된 분석법을 적용하는 것이 중요합니다.

5. AAV에서 실제로 확인해야 할 것은 ‘역가 + 품질 + 기능’입니다

그렇다면 AAV 품질을 평가할 때 무엇을 봐야 할까요?

간단하게 정리하면 다음과 같습니다.

역가: 얼마나 존재하는가

품질: 무엇이 포함되어 있는가

기능: 원하는 생물학적 활성을 나타내는가

대표적인 평가 항목은 다음과 같습니다.

즉, AAV 품질은 하나의 역가 수치가 아니라 여러 품질 특성을 종합적으로 평가해야 합니다.

6. 그렇다면 역가가 낮은 AAV가 더 좋은 것일까요?

물론 그렇다는 의미는 아닙니다.

“고역가 = 고품질이 항상 성립하는 것은 아니다”라는 것은

“저역가 AAV가 더 좋다”

라는 뜻이 아닙니다.

AAV 역가가 지나치게 낮으면 목표 투여량이나 실험 조건을 충족하기 위해 더 많은 바이러스 용액이 필요할 수 있습니다.

따라서 중요한 것은 단순히 가장 높은 역가를 만드는 것이 아니라,

연구 목적에 적합한 역가와 안정적인 품질, 순도 및 기능적 활성을 균형 있게 확보하는 것입니다.

7. AAV의 ‘고역가’를 확인할 때 체크해야 할 7가지

AAV 제품 사양이나 분석 결과를 확인할 때는 역가 숫자만 보지 말고 다음 항목도 함께 확인해 보세요.

① 어떤 역가인가? VG 역가인지 캡시드 역가인지 확인합니다.

② 어떤 분석법을 사용했는가? qPCR, ddPCR 등 측정 방법을 확인합니다.

③ Full / Empty / Partial 상태는 어떠한가?

④ 벡터 게놈은 적절한 상태인가?

⑤ 순도는 어떠한가? HCP, 잔류 DNA, 엔도톡신 등의 지표를 확인합니다.

⑥ 기능적 활성 데이터가 있는가?

⑦ 로트 간 일관성이 확보되어 있는가?

결국 중요한 것은 단순히 “어떤 AAV의 역가가 가장 높은가?”가 아니라, 여러 품질 지표를 종합적으로 비교하는 것입니다.

PackGene은 어떤 AAV 서비스를 제공할 수 있을까요?

AAV 프로젝트에서는 단순히 “역가가 높은 제품”을 선택하는 것보다 연구 목적, 투여 경로, 필요한 용량 및 품질 요구사항 등을 종합적으로 고려해 AAV를 설계하고 생산하는 것이 중요합니다.

PackGene은 AAV 연구개발부터 전임상 및 임상 개발 단계까지 다양한 프로젝트 요구사항에 대응할 수 있도록 벡터 디자인 및 플라스미드 구축, AAV 패키징, 정제, 품질 분석 및 다양한 등급의 AAV 생산 서비스를 제공합니다.

주요 서비스는 다음과 같습니다.

• AAV 벡터 디자인 및 플라스미드 구축: GOI, 프로모터, 혈청형 및 연구 목적에 따른 벡터 설계 및 구축
• AAV 패키징 서비스: 다양한 AAV 혈청형 및 엔지니어드 캡시드를 활용한 AAV 생산
• AAV 정제 서비스: 연구 목적과 프로젝트 요구사항에 따른 AAV 정제
• AAV 품질 분석 서비스: AAV 역가, 캡시드 관련 지표, 순도 등 다양한 품질 평가
• NHP Grade AAV: 비인간 영장류(NHP)를 포함한 동물실험용 AAV
• GMP AAV 서비스: 전임상 및 이후 개발 단계에 필요한 GMP 대응 AAV 생산 지원

AAV 프로젝트에서는 높은 역가만을 추구하기보다 역가, 입자 구성, 벡터 게놈 완전성, 순도, 기능적 활성 및 로트 간 일관성을 종합적으로 평가하는 것이 중요합니다.

AAV 패키징, 동물실험 또는 품질 분석을 계획하고 있다면 GOI, 사용 예정 혈청형, 투여 경로 및 필요한 용량 등의 프로젝트 정보를 바탕으로 적합한 AAV 생산 및 품질 분석方案을 상담할 수 있습니다.