AAV 기반 유전자 knockdown 초기 단계 FAQ

Q1：AAV knockdown 실험에서 초기 검증이 왜 필요한가요？

A：shRNA 서열의 효율성, 벡터 설계의 적절성, 감염 시스템의 적합성을 사전에 확인하여 동물실험 실패 위험을 크게 줄일 수 있습니다.

Q2：세포 실험 없이 바로 동물실험을 진행해도 되나요？

A：권장되지 않습니다. in vitro 검증을 통해 효율적인 서열을 선별하면 in vivo 실험 성공률을 높이고 비용을 절감할 수 있습니다.

Q3：초기 단계에서 몇 개의 shRNA를 설계해야 하나요？

A：일반적으로 3~5개의 후보 서열을 설계하고, in vitro 평가를 통해 1~2개의 최적 서열을 선정합니다.

Q4：초기 단계의 주요 과정은 무엇인가요？

A：다음 단계로 구성됩니다：
1）shRNA 설계 및 스크리닝
2）in vitro knockdown 검증
3）AAV 벡터 구축 및 최적화
4）소규모 바이러스 생산 및 역가 측정
5）동물 예비실험（pilot study）

Q5：knockdown 효율은 어떻게 평가하나요？

A：qPCR 및 Western blot을 통해 평가하며,

• mRNA 70% 이상 감소

• 단백질 발현 유의하게 감소
  시 유효한 것으로 판단합니다.

Q6：AAV 혈청형 선택이 필요한가요？

A：네. 혈청형에 따라 조직 특이성이 다르므로, 목표 조직에 적합한 혈청형을 선택하는 것이 중요합니다.

Q7：AAV knockdown 효과는 언제 나타나나요？

A：일반적으로,

• 1주: 감염 확인

• 2~3주: knockdown 효과

• 3~4주: 안정적 발현

Q8：초기 단계 실패 원인은 무엇인가요？

A：주요 원인은 다음과 같습니다：

• 비효율적인 shRNA 설계

• in vitro 검증 부족

• 낮은 바이러스 역가

• 부적절한 프로모터 선택

• 너무 이른 분석 시점

Q9：초기 검증 후 바로 본 실험으로 진행할 수 있나요？

A：다음 조건을 충족하면 가능합니다：

• 고효율 shRNA 확보

• 감염 효율 확인

• 발현 시간 파악

• 독성 없음

Q10：통합 서비스 제공이 가능한가요？

A：네. shRNA 설계부터 AAV 생산 및 in vitro / in vivo 검증까지 원스톱 서비스를 제공합니다。