AAV(아데노연관바이러스)의 정제 방법에는 어떤 것들이 있습니까?

AAV(아데노연관바이러스)의 정제 방법은 요구되는 순도, 생산 규모 및 적용 목적에 따라 선택됩니다. 대표적인 정제 방법은 다음과 같습니다.

1. 아이오딕사놀 밀도구배 초원심분리

(Iodixanol Gradient Ultracentrifugation)

원리:서로 다른 밀도 구배(일반적으로 15%, 25%, 40%, 60% iodixanol)를 이용한 초원심분리를 통해 바이러스 입자의 밀도 차이에 따라 AAV를 분리합니다.

특징

• 연구실에서 가장 널리 사용되는 방법

• 기술이 비교적 성숙하며 성공률이 높음

• 비교적 높은 순도를 확보 가능

• 소규모 생산에 적합

한계

• Empty capsid(빈 캡시드)를 완전히 분리하기 어려움

• 대규모 생산에는 적합하지 않음

• 초원심분리 장비 필요

주요 적용

• 연구용 AAV 생산

• 동물 실험

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2. 염화세슘 밀도구배 초원심분리

(CsCl Gradient Ultracentrifugation)

원리:CsCl 밀도구배를 이용하여 서로 다른 밀도를 가진 AAV 입자를 분리합니다.

특징

• Empty capsid와 Full capsid를 효과적으로 분리 가능

• 매우 높은 순도 확보 가능

한계

• CsCl은 독성이 있어 충분한 투석이 필요

• 원심분리 시간이 길다(24–48시간)

• 바이러스 활성에 영향을 줄 수 있음

• 현재 사용 빈도는 감소 추세

주요 적용

• 고순도 연구용 AAV

• Empty capsid 비율 연구

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3. 친화성 크로마토그래피

(Affinity Chromatography)

원리:AAV 캡시드와 특이적 리간드(예: AAVX, AVB Sepharose)의 결합을 이용하여 바이러스를 정제합니다.

대표 매트릭스

• AVB Sepharose

• AAVX affinity resin

특징

• 산업 생산에서 널리 사용

• 공정이 단순하고 스케일업이 용이

• 정제 효율이 높음

• 재현성이 우수함

한계

• Empty capsid 완전 분리는 어려움

• 비용이 비교적 높음

주요 적용

• GMP 생산

• 대규모 AAV 생산

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4. 이온교환 크로마토그래피

(Ion Exchange Chromatography, IEX)

원리:AAV 입자 표면의 전하 차이를 이용하여 분리합니다.

특징

• Empty / Full capsid를 일정 수준 분리 가능

• 산업화 생산에 적합

• 비교적 높은 순도 확보 가능

주요 유형

• 음이온 교환 크로마토그래피(AEX)

• 양이온 교환 크로마토그래피(CEX)

주요 적용

• GMP 생산

• 대규모 바이러스 정제

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5. 크기배제 크로마토그래피

(Size Exclusion Chromatography, SEC)

원리:입자 크기 차이에 따라 바이러스와 불순물을 분리합니다.

특징

• 비교적 온화한 정제 방식

• 버퍼 교환에 활용 가능

• 정제 능력은 제한적

주요 적용

• 2차 정제 단계

• Polishing 정제

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6. PEG 침전법

(PEG Precipitation)

원리:폴리에틸렌글리콜(PEG)을 사용하여 바이러스 입자를 침전시킵니다.

특징

• 공정이 간단함

• 비용이 낮음

• 조추출 단계에 적합

한계

• 순도가 낮음

• 추가 정제 과정 필요

주요 적용

• 상류 공정 농축

• AAV 초기 농축 및 회수