AAV 바이러스의 발현이 약하거나 발현되지 않는 이유는 무엇인가요?

AAV 발현 효율은 벡터 설계, 혈청형 선택, 바이러스 품질, 투여 방법, 분석 시점 등 다양한 요인의 영향을 받습니다. 발현이 약하거나 확인되지 않는 경우 아래 항목을 점검하시기 바랍니다.

1. 프로모터 선택이 적절한가요?

프로모터 활성은 세포 및 조직 유형에 따라 차이가 있습니다.

• CMV 프로모터는 일부 1차 세포 및 신경 조직에서 침묵화(silencing)가 발생할 수 있습니다

• EF1α 프로모터는 안정적이나 발현 강도는 중간 수준입니다

• CAG 및 hSyn 프로모터는 신경계에서 높은 발현 효율을 보입니다

권장 사항: 목표 조직에 적합한 프로모터를 선택하고, 필요 시 in vitro 사전 검증을 수행하십시오.

2. 혈청형이 대상 조직 및 동물종에 적합한가요?

혈청형에 따라 조직 친화성이 다릅니다.

• AAV2: 국소 주입에 적합

• AAV9: 혈액-뇌 장벽(BBB) 통과 가능

• AAV-PHP.eB: 마우스 뇌에서 고효율, 영장류에서는 제한적

권장 사항: 동물종 및 투여 경로에 맞는 혈청형을 선택하십시오.

3. 바이러스 역가가 충분한가요?

• in vivo 실험: 일반적으로 10¹¹–10¹³ vg/마우스

• 세포 실험: 적절한 MOI 설정 필요

반복적인 동결·해동은 역가 감소를 초래할 수 있습니다.

4. 벡터 구조에 문제가 없는가요?

• 삽입 유전자 길이가 4.7 kb 포장 한계를 초과하지 않았는지

• ITR이 완전한지

• polyA 신호가 포함되어 있는지

• 목적 유전자의 세포 독성 여부

플라스미드 시퀀싱 확인을 권장합니다.

5. 투여 과정이 적절했나요?

• 목표 부위에 정확히 주입되었는지

• 정맥 주입이 성공적으로 이루어졌는지

• 주입 속도가 적절했는지

조직 내 바이러스 게놈을 PCR로 확인할 수 있습니다.

6. 분석 시점이 적절한가요?

AAV 발현에는 시간이 필요합니다.

• 세포 실험: 3–5일

• 마우스 체내: 일반적으로 2–4주 후 최대 발현

너무 이른 시점에 분석하면 발현이 낮게 평가될 수 있습니다.

7. 면역 반응의 영향은 없나요?

• 기존 중화항체 존재

• 목적 단백질의 높은 면역원성

• 강한 프로모터에 의한 면역 유도

기술 지원을 위해 필요한 정보

• 사용한 혈청형

• 동물종 및 투여 방법

• 투여량 (vg/마우스 또는 MOI)

• 분석 시점

• 분석 방법 (형광, qPCR, WB 등)