AAV 동물실험 발현 이상 FAQ

Q1: AAV 투여 후 목적 유전자 발현이 확인되지 않습니다. 바이러스가 비활성화된 것인가요?

반드시 그렇지는 않습니다.

가능한 원인:

• 주입 위치 오차

• 투여 용량 부족

• 분석 시점이 너무 이른 경우

• 프로모터와 표적 조직의 부적합

• 높은 empty capsid 비율

• 트랜스진 자체의 발현 문제

권장 점검 절차:

1. 1.조직학적 주입 위치 확인

2. 2.벡터 게놈 copy 수 분석 (qPCR)

3. 3.mRNA 발현 분석 (RT-qPCR)

4. 4.단백질 발현 분석 (WB / IF)

Q2: 형광 신호가 약할 경우 어떻게 개선할 수 있습니까?

① 투여 용량 최적화

• 뇌 정위 주입: ≥1E12 vg/mL 권장

• 정맥 주사: ≥1E13 vg/mL 권장

② 프로모터 재검토

• 강력 범용형: CAG, EF1α

• 신경 특이적: hSyn

• 간 특이적: TBG

※ 조직 특이적 프로모터는 일반적으로 발현 강도가 낮습니다.

③ 분석 시점 연장

• CNS 실험: 3–4주 후 분석 권장

• 간 실험: 2주 이상

④ 항체 기반 신호 증폭

• anti-GFP 항체 면역염색 병행

Q3: 혈청형 선택이 중요한가요?

매우 중요합니다.

대표 예시:

• AAV2: 신경계 연구에 널리 사용

• AAV9: 혈액-뇌 장벽 통과 가능

• PHP.eB: C57BL/6 마우스 CNS에서 고효율

• AAV8: 간 조직 고발현

※ 동물 종 및 계통에 따라 발현 효율 차이가 큽니다.

문헌 검토 및 소규모 예비 실험을 권장합니다.

Q4: 벡터 크기가 발현에 영향을 미칩니까?

네.

AAV 최대 포장 용량은 약 4.7 kb (ITR 포함)입니다.

초과 시:

• 낮은 역가

• 불완전 패키징

• 발현 불안정

대응 방안:

• 불필요 서열 제거

• mini promoter 사용

• dual AAV 전략 검토

Q5: empty capsid 비율이 발현에 영향을 줍니까?

예.

empty capsid는 수용체를 점유하여 실제 감염 효율을 저하시킵니다.

대응:

• 고순도 정제 공정 사용

• Full/Empty ratio 데이터 확인

Q6: 세포 수준 사전 검증이 필요합니까?

강력히 권장합니다.

세포 실험을 통해:

• 발현 가능 여부

• 세포 독성

• 프로모터 활성

을 사전에 확인하여 동물실험 리스크를 줄일 수 있습니다.

Q7: 발현 안정화까지 일반적으로 얼마나 걸립니까?

일반적 경향:

• 1주: 발현 시작

• 2–3주: 발현 증가

• 3–4주: 안정화 단계

조기 분석은 위음성(false negative)의 원인이 될 수 있습니다.