재조합 AAV(Adeno-Associated Virus) 제조 공정에서 엔도톡신(Endotoxin)은 핵심 품질관리(Quality Control, QC) 항목 중 하나입니다. 엔도톡신은 주로 그람음성균 세포벽 성분인 지질다당체(LPS)에서 유래하며, 허용 기준을 초과할 경우 동물실험에서 염증 반응을 유발하거나 임상 적용 시 안전성 문제를 초래할 수 있습니다.
1. AAV 엔도톡신 시험의 목적
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동물실험 안전성 확보
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실험 데이터의 신뢰성 보장
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IND 제출 및 임상 등급 제품의 규제 요건 충족
2. 주요 시험 방법
(1) LAL 시험법 (Limulus Amebocyte Lysate Assay)
투구게 유래 시약을 사용하여 LPS에 특이적으로 반응하는 원리를 기반으로 하는 시험법입니다.
시험 유형:
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겔화법 (Gel-clot)
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발색법 (Chromogenic)
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탁도법 (Turbidimetric)
특징:
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높은 민감도 (0.01 EU/mL 수준 검출 가능)
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USP <85> 등 각국 약전에 수록
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GMP 제조에서 널리 사용
※ AAV 시료는 반응 억제 또는 증강 효과를 유발할 수 있으므로, 간섭 시험(Inhibition/Enhancement Test)이 필요합니다.
(2) rFC 시험법 (Recombinant Factor C)
재조합 Factor C 단백질을 이용한 엔도톡신 검출 방법입니다.
특징:
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동물 유래 원료 미사용
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높은 특이성 및 재현성
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최근 GMP 생산 분야에서 채택 증가
3. 일반적인 관리 기준
| 적용 분야 | 일반 기준 |
| 세포 실험용 | < 5 EU/mL (권장) |
| 동물 실험용 | < 5–10 EU/mL |
| 임상 등급 제품 | < 5 EU/kg 체중 (USP 기준) |
※ 최종 기준은 투여 경로(뇌내, 정맥내, 근육내 등) 및 투여 용량에 따라 산정됩니다.
4. 시험 시 유의사항
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시료의 적절한 희석
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억제/증강 간섭 시험 수행
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무발열(pyrogen-free) 소모품 사용
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무균 환경 유지
5. 엔도톡신 저감 전략
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Endotoxin-free 플라스미드 사용
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크로마토그래피 정제 공정 적용
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초여과 및 버퍼 교환
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전 공정 무발열 관리 체계 확립
About PackGene
PackGene Biotech is a world-leading CRO and CDMO, excelling in AAV vectors, mRNA, plasmid DNA, and lentiviral vector solutions. Our comprehensive offerings span from vector design and construction to AAV, lentivirus, and mRNA services. With a sharp focus on early-stage drug discovery, preclinical development, and cell and gene therapy trials, we deliver cost-effective, dependable, and scalable production solutions. Leveraging our groundbreaking π-alpha 293 AAV high-yield platform, we amplify AAV production by up to 10-fold, yielding up to 1e+17vg per batch to meet diverse commercial and clinical project needs. Moreover, our tailored mRNA and LNP products and services cater to every stage of drug and vaccine development, from research to GMP production, providing a seamless, end-to-end solution.
