AAV 내독소 검사 (AAV Endotoxin Testing)

1. AAV 내독소란?

AAV 제조 과정에서의 내독소는 주로 그람음성균 유래 지질다당류(LPS)에서 발생합니다.
주요 오염 경로는 다음과 같습니다.

• 대장균 유래 플라스미드 제조 과정

• 세포 배양 및 정제 공정

• 시약, 물 또는 작업 환경으로부터의 오염

AAV는 세균을 포함하지 않지만, 극미량의 내독소도 실험 결과와 안전성에 영향을 줄 수 있습니다.

2. AAV 내독소 검사의 중요성

내독소 수치가 높을 경우 다음과 같은 문제가 발생할 수 있습니다.

• 체외 세포 실험: 세포 독성, 염증 반응, 비특이적 유전자 발현

• 동물 실험: 발열, 면역 반응 유도

• 임상 연구: 피험자 안전성 위험

따라서 내독소 검사는 AAV 품질 관리에서 필수적인 평가 항목입니다.

3. AAV 내독소 검사 방법

가장 널리 사용되는 방법은 LAL 시험(Limulus Amebocyte Lysate Test)입니다.

• 겔화법(Gel-clot)

• 비탁법(Turbidimetric)

• 발색법(Chromogenic)

발색법은 높은 민감도와 재현성을 갖추어 GMP 등급 AAV 생산에 널리 적용됩니다.

4. AAV 내독소 허용 기준(참고)

일반적으로 적용되는 기준 예시는 다음과 같습니다.

• 세포 실험용 AAV: ≤ 5 EU/mL

• 동물 실험용 AAV: ≤ 1 EU/mL 또는 ≤ 0.5 EU/mL

• 임상 / GMP 등급 AAV: 투여 경로 및 용량에 따라 산정 (일반적으로 ≤ 5 EU/kg)

5. 내독소 감소 전략

• 저내독소 플라스미드 사용

• 내독소 관리 시약 및 소모품 적용

• 정제 공정(크로마토그래피, 초여과) 최적화

• 출하 전 전수 내독소 검사 실시