Q: 렌티바이러스(Lentivirus) 패키징 후 역가가 낮게 나오는 이유는 무엇인가요?
A:렌티바이러스 역가 저하는 플라스미드 설계, 패키징 세포 상태, 트랜스펙션 조건, 바이러스 수확 및 농축 과정, 그리고 역가 측정 방법 중 하나 또는 복합적인 요인에 의해 발생할 수 있습니다.
주요 원인은 다음과 같습니다:
1.전달 플라스미드 설계 문제
- 삽입 유전자의 크기가 과도함(일반적으로 8 kb 초과)
- 세포 독성이 있는 유전자 발현
- 부적절한 프로모터 사용
- 반복 서열 또는 높은 GC 함량
2.패키징 플라스미드 품질 및 비율 문제
- 플라스미드 품질 저하 또는 엔도톡신 오염
- Gag/Pol, Rev, VSV-G 비율 불균형
3.패키징 세포(HEK293T) 상태 이상
- 과도한 계대 배양
- 트랜스펙션 시 세포 밀도 부적절
- 마이코플라스마 오염
4.트랜스펙션 효율 저하
- 트랜스펙션 시약 선택 오류
- DNA와 시약 비율 최적화 부족
- 배지 조건 부적합
5.바이러스 수확 및 농축 과정 문제
- 수확 시점이 너무 이르거나 횟수 부족
- 반복적인 동결·해동
- 농축 과정 중 바이러스 손실
6.역가 측정 방법 차이
- qPCR 역가와 기능적 역가 간 불일치
- 감염 효율이 낮은 세포주 사용
안정적인 고역가 렌티바이러스 생산을 위해서는 각 공정 단계의 체계적인 최적화가 필요합니다.
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