FAQ｜AAV를 세포 실험에 사용할 수 있나요?

1. AAV를 체외 세포 실험에 사용할 수 있나요?

네, 사용 가능합니다.

AAV는 체외 세포 형질 도입(트랜스덕션, In Vitro Transduction)의 효과적인 도구 중 하나로, 다음과 같은 분야에 널리 활용됩니다:

• 목적 유전자의 과발현 또는 녹다운(shRNA 이용)

• 유전자 편집(sgRNA 발현)

• 리포터 유전자 검출

• 장기적인 유전자 기능 연구

2. 어떤 종류의 세포가 AAV 감염에 적합한가요?

AAV는 특히 분열이 느리거나 분열하지 않는 세포를 감염시키는 데 뛰어납니다. 예:

• 뉴런, 신경교세포, 신경줄기세포

• 심근세포, 골격근세포

• 간세포, 일부 1차 배양 세포

• 분화된 세포 또는 특정 줄기세포

HEK293, HeLa와 같이 빠르게 분열하는 세포주에서는 AAV 게놈이 희석되기 쉽고, 장기적 발현 효율이 낮아질 수 있습니다. 이 경우 렌티바이러스나 플라스미드 형질전환이 더 나은 선택일 수 있습니다.

3. 세포 실험에서 AAV를 사용하는 주요 장점은 무엇인가요?

• 안전성 높음: 야생형 AAV는 병원성이 없으며, 재조합 AAV는 일반적으로 숙주 게놈에 통합되지 않아(에피솜 형태로 존재) 발암 위험이 극히 낮습니다.

• 세포 독성 낮음: 세포 상태에 미치는 영향이 적어 민감한 1차 배양 세포나 뉴런에 특히 적합합니다.

• 발현이 오래 지속되고 안정적: 비분열 세포에서 수개월 이상 안정적인 발현이 가능합니다.

• 혈청형 다양성: 다양한 혈청형(AAV1, 2, 5, 6, 8, 9, DJ, PHP.eB 등)마다 세포 친화성이 다르므로, 적절한 혈청형을 선택하여 특정 세포의 감염 효율을 최적화할 수 있습니다.

4. 실험 설계 및 운영 시 특히 주의해야 할 점은 무엇인가요?

• 혈청형 선별: 세포 종류가 혈청형 선택의 첫 번째 기준입니다. 사전에 예비 실험을 통해 최적의 혈청형을 결정하는 것을 강력히 권장합니다.

• 높은 감염 복수(MOI): 체외 실험에는 일반적으로 높은 바이러스 양이 필요하며, 일반적인 MOI 범위는 10⁴ – 10⁶ vg/세포 입니다. 세포 종류에 따라 최적화가 필요합니다.

• 발현 시작이 느림: 감염 후 목표 단백질이 충분히 발현되기까지 일반적으로 3~7일이 소요됩니다. 실험 설계 시 충분한 시간을 확보하세요.

• 포장 용량 제한: AAV 벡터의 유효 포장 상한은 약 4.7 kb입니다(프로모터, 목적 유전자, polyA 등 모든 요소 포함). 벡터 설계 시 길이를 엄격히 제한해야 합니다.

5. 어떤 경우에 AAV를 세포 실험에 사용하는 것을 권장하지 않나요?

다음과 같은 경우에는 다른 전달 방식을 고려하세요:

• 빠른 검증(24~72시간)이 필요한 경우: 플라스미드 형질전환이 더 빠르고 경제적입니다.

• 세포 분열이 매우 빠른 경우: 게놈에 통합되는 렌티바이러스의 특성이 이러한 세포에 더 적합합니다.

• 목적 유전자 조각이 너무 크거나(>4.7kb) 다중 유전자의 공동 발현이 필요한 경우: 렌티바이러스 사용이나 다중 벡터 공동 감염 전략을 고려하세요.

• 유도형 또는 일시적인 고발현이 필요한 경우: 아데노바이러스나 전기천공법과 같은 다른 시스템이 더 적합할 수 있습니다.