PCR 방법을 이용한 AAV 바이러스 역가 측정 (FAQ)

PCR 방법으로 AAV 바이러스 역가는 어떻게 측정하나요?

답변:
PCR 방법(qPCR 또는 ddPCR)은 AAV 바이러스에 포장된 바이러스 게놈 DNA 복제 수를 정량하여 **AAV 게놈 역가(vg/mL)**를 계산하는 방법입니다.
현재 연구 및 AAV 위탁 패키징 서비스에서 가장 널리 사용되는 표준 방법입니다.

PCR 방법으로 측정되는 역가의 종류는 무엇인가요?

답변:
PCR 방법은 AAV 게놈 역가(viral genome, vg/mL)를 측정합니다.
이는 바이러스 캡시드 안에 정상적으로 포장된 게놈 DNA의 양을 의미하며, 감염 역가 또는 기능적 역가와는 다릅니다.

PCR 방법의 측정 원리는 무엇인가요?

답변:
PCR을 이용한 AAV 역가 측정은 다음과 같은 절차로 진행됩니다.

1. DNase I 처리: 포장되지 않은 유리 DNA 제거

2. 바이러스 캡시드 분해: AAV 게놈 방출

3. qPCR / ddPCR 정량 분석

4. 게놈 역가(vg/mL) 계산

qPCR과 ddPCR의 차이점은 무엇인가요?

답변:

일반적인 연구 목적에는 qPCR이 주로 사용됩니다.

PCR 역가 측정에 사용되는 주요 타깃은 무엇인가요?

답변:

• ITR(역말단 반복서열) – 가장 보편적

• WPRE

• polyA

• 프로모터 서열(CMV, CAG 등)

그중 ITR 서열은 혈청형에 관계없이 사용 가능하여 가장 널리 활용됩니다.

PCR로 측정한 AAV 역가의 일반적인 범위는 어느 정도인가요?

답변:

• 1×10¹¹ – 1×10¹² vg/mL (일반 연구용)

• 1×10¹² – 1×10¹³ vg/mL (공정 최적화 후)

• 고품질 정제 시 더 높은 역가를 얻을 수 있습니다.

PCR 역가는 감염 효율을 의미하나요?

답변:
아닙니다. PCR 결과는 게놈 복제 수를 반영하며, 감염 효율은 혈청형, 세포 종류, MOI, 실험 조건 등에 따라 달라집니다.

PCR로 측정한 역가가 높게 나오는 이유는 무엇인가요?

답변:

• DNase I 처리 불충분

• 플라스미드 DNA 오염

• 표준물질 또는 계산 방식 차이

정확한 결과를 위해서는 표준화된 전처리 과정이 필수적입니다.

요약

PCR 방법(qPCR / ddPCR)은 AAV 바이러스 게놈 DNA를 정량하여 게놈 역가(vg/mL)를 계산하는 신뢰성 높은 표준 분석법입니다.