AAV 패키징 및 회수 고객 FAQ

Q1: AAV 패키징 후 바이러스는 배양 상등액으로 바로 방출되나요?

완전히 방출되지는 않습니다.

AAV 는 패키징 과정에서 약 70~90%가 세포 내에 존재하며, 상등액으로 방출되는 바이러스는 일부에 불과합니다. 따라서 상등액만 회수할 경우 전체 수율이 낮아질 수 있습니다.

Q2: AAV 회수 시 동결-해동이 반드시 필요합니까?

필수는 아니지만, 연구용에서는 일반적으로 사용됩니다.

동결-해동 여부는 바이러스 수율, 순도 및 적용 목적에 따라 결정됩니다.

• 연구용 AAV:
  세포와 상등액을 함께 회수한 후 2~3회 동결-해동을 통해 세포 내 AAV 를 방출하여 총 역가를 높입니다.

• 고품질 또는 규제 기준 생산:
  동결-해동은 권장되지 않으며, 효소 처리 또는 완만한 세포 파쇄 방법이 사용됩니다.

Q3: 동결-해동의 목적은 무엇인가요?

주요 목적은 다음과 같습니다:

• 세포 구조 파괴

• 세포 내 AAV 입자 방출

• 총 바이러스 회수량 증가

Q4: 동결-해동이 AAV 품질에 영향을 미치나요?

일정 수준의 영향이 있습니다.

수율은 증가할 수 있으나, 다음과 같은 단점이 있습니다:

• 숙주 세포 단백질(HCP) 증가

• 숙주 세포 DNA 잔류량 증가

• 후속 정제 공정 부담 증가

따라서 동결-해동은 주로 연구 목적에 적합합니다.

Q5: 동결-해동은 몇 회가 적절한가요?

일반적으로 2~3회(−80℃ ↔ 37℃)가 권장됩니다.

과도한 반복은 수율 개선 효과가 없으며, 오히려 불순물 증가를 초래할 수 있습니다.

Q6: 상등액만 회수하고 동결-해동을 하지 않아도 되나요?

가능하지만 다음 사항을 고려해야 합니다:

• 불순물은 상대적으로 적음

• 바이러스 역가는 낮아짐

초기 기능 검증이나 낮은 역가가 허용되는 실험에 적합합니다.

Q7: 전임상 또는 GMP 등급 AAV 생산에서도 동결-해동을 사용하나요?

일반적으로 사용하지 않습니다.

전임상 및 GMP 생산에서는 다음과 같은 방법이 선호됩니다:

• 핵산 분해 효소(Benzonase 등) 처리

• 완만한 화학적 세포 파쇄

• 기계적 파쇄

이를 통해 회수 효율과 품질 관리의 균형을 확보할 수 있습니다.

Q8: 동결-해동은 모든 바이러스 벡터에 적용할 수 있나요?

적용할 수 없습니다.

동결-해동은 AAV 와 같은 비외피성, 세포 내 존재 비율이 높은 바이러스에 적합합니다.
렌티바이러스와 같은 외피 바이러스에는 입자 손상 위험이 있어 권장되지 않습니다.