AAV 일반적인 적정값 측정 방법 요약

1. qPCR(정량 PCR)

원리：

• 바이러스 게놈 카피 수(vg, viral genome)를 검출. AAV 게놈의 특정 서열(보통 ITR 또는 전사 유전자)을 증폭하여 정량.

장점：

• 감도가 높아 낮은 적정값도 측정 가능
• 정량 정확도 및 재현성이 높음
• 감염성에 의존하지 않아 모든 혈청형에 사용 가능

단점：

• 감염성이 없는 ‘빈 캡시드’를 구분할 수 없음
• 고순도 DNA 추출 필요

적용：

• 생산 과정 모니터링
• 배치 간 게놈 함량 비교

2. ELISA(효소면역측정법)

원리：

• 특이 항체로 AAV 캡시드 단백질(VP1/VP2/VP3)을 인식하여 바이러스 입자 수(pp) 정량.

장점：

• 간단하고 빠름
• 바이러스 입자 총수를 직접 측정 가능
• 세포 감염 불필요

단점：

• 빈 캡시드와 감염성 바이러스 구분 불가
• 혈청형별 특이 항체 필요

적용：

• 바이러스 총량 개략 측정
• qPCR과 병행하여 패키징 효율(vg/pp 비율) 평가

3. 감염성 적정(Titer / Transduction Assay)

원리：

• 세포 또는 동물 모델에 감염시켜 바이러스 감염 능력 평가(예: 형광 리포터 유전자 발현).

장점：

• 실제 감염 능력 반영
• 배치 간 기능 차이 평가 가능

단점：

• 시간 소요(2~3일)
• 세포 유형 및 감염 조건에 의존

적용：

• 기능성 확인
• 생산 공정 최적화

4. 전자현미경(EM)

원리：

• 바이러스 입자를 직접 관찰하고 개수를 카운트.

장점：

• 입자를 직접 시각화
• 완전 입자와 빈 캡시드 구분 가능

단점：

• 고가, 조작 난이도 높음
• 다수 샘플 측정에는 부적합

적용：

• 바이러스 입자 구조 분석
• 고급 연구 또는 산업 공정 검증

5. 기타 방법

정리

추천: qPCR + ELISA로 총 입자 수와 게놈 수 평가 후 감염성 적정으로 기능 확인.