AAV 패키징에 필요한 플라스미드는 무엇인가?

AAV 패키징에는 일반적으로 3-플라스미드 시스템(Three-plasmid system) 이 가장 널리 사용되며, 그 외에 2-플라스미드 및 4-플라스미드 시스템도 존재한다. 핵심 구성 요소는 다음과 같다.

1. 전달 플라스미드 (Transfer Plasmid)

포함하는 요소:

• ITR(Inverted Terminal Repeat) × 2

• 목적 유전자 발현 카세트
  (프로모터 → cDNA → PolyA)

• 필요 시 WPRE, Enhancer 등 조절 요소 추가 가능

역할:
AAV가 운반할 유전체(바이럴 게놈) 를 제공하며, 최종적으로 세포에 전달될 유전 정보를 결정한다.

예: pAAV-MCS, pAAV-CAG-GFP 등

2. 캡시드 플라스미드 (Capsid Plasmid / Rep-Cap Plasmid)

포함하는 요소:

• Rep 유전자: AAV 복제에 필수

• Cap 유전자: 캡시드 단백질(VP1/VP2/VP3) 인코딩

역할:

• 바이러스의 혈청형(AAV2, AAV8, AAV9, PHP.eB 등) 을 결정

• AAV 외피를 형성하는 구조 단백질 제공

3. 헬퍼 플라스미드 (Helper Plasmid)

포함하는 요소:

• 아데노바이러스 보조 유전자 E2A, E4, VA 등

역할:
AAV 패키징 과정에 필요한 보조 기능을 제공하지만,
바이러스 유전자를 포함하지 않아 아데노바이러스를 생성하지는 않는다.

예: pHelper

4. (선택적) 2-플라스미드 시스템

일부 상업 시스템에서는 다음 두 개만 사용:

• 전달 플라스미드

• Rep-Cap + Helper 결합 대형 플라스미드

특징:
전송(트랜스펙션)이 단순하고 생산 효율이 높은 경우가 많다.

5. (선택적) 4-플라스미드 시스템

특수한 연구나 엔지니어링 AAV에서 사용되며 구성:

• Transfer

• Rep

• Cap

• Helper

Rep/Cap 조합을 유연하게 변경할 수 있다는 장점이 있다.