렌티바이러스(Lentivirus) 패키징(plasmid packaging)은 유전자 전달용 벡터 시스템에서 매우 중요한 단계입니다. 패키징에 사용되는 플라스미드(plasmid)는 일반적으로 3~4 플라스미드 시스템으로 구성됩니다. 각 플라스미드는 서로 다른 기능을 담당하여, 안전성과 효율을 모두 확보합니다.
1️⃣ 3-플라스미드 시스템 (가장 흔함)
| 플라스미드 | 주요 유전자 | 역할 |
| ① Transfer plasmid (벡터 플라스미드) | GOI (목표 유전자), ψ (packaging signal), LTR | 전달하고자 하는 유전자를 포함. 숙주세포에 실제로 들어가는 RNA 형태로 패키징됨 |
| ② Packaging plasmid (포장 플라스미드) | gag, pol, rev | 바이러스의 구조 단백질(Gag), 효소(Pol), RNA 수출 단백질(Rev) 제공 |
| ③ Envelope plasmid (피막 플라스미드) | VSV-G (또는 다른 envelope 단백질) | 바이러스 외피 형성. 감염 범위(tropism)를 결정 |
2️⃣ 4-플라스미드 시스템
더 안전하고 정교한 최신 시스템입니다. 일부 유전자를 분리하여 재조합 위험을 최소화합니다.
| 플라스미드 | 주요 유전자 | 역할 |
| ① Transfer plasmid | 목적 유전자, LTR, ψ | 전달 벡터 |
| ② gag-pol plasmid | gag, pol | 구조 단백질, 효소 |
| ③ rev plasmid | rev | Rev 단백질 별도 공급 |
| ④ envelope plasmid | VSV-G | 외피 형성 |
📌 장점: 재조합으로 인한 복제형 바이러스 생성 위험 최소화
📌 단점: 트랜스펙션 효율이 조금 낮을 수 있음
3️⃣ 주요 포인트 정리
세포주: 주로 HEK293T 사용 (높은 트랜스펙션 효율과 바이러스 생산능)
전달 유전자 (GOI): shRNA, cDNA, CRISPR-Cas9 등 다양하게 가능
Envelope 단백질 선택:
- VSV-G → 광범위한 감염 범위, 안정적
- MOKOLA, RD114, Ampho 등 → 특정 세포 특이적
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