AAV 패키징 효율을 높이는 방법

AAV(아데노 관련 바이러스)의 패키징 효율을 높이는 것은 바이러스 역가를 높이고 생산 비용을 절감하는 데 핵심적입니다. 이를 위해 플라스미드 비율 최적화, 생산 공정 개선, 유전자 및 세포 공정 설계 등 다양한 전략을 종합적으로 적용할 수 있습니다.

다음 표에서 AAV 패키징 효율 향상을 위한 주요 전략과 핵심 방법을 확인하실 수 있습니다.

패키징 효율 최적화를 위한 실질적인 조언

이론적인 전략을 실제 실험에 적용할 때는 다음과 같은 실질적인 요소들을 꼼꼼히 점검하는 것이 중요합니다.

• 플라스미드 품질 관리: 플라스미드 순도가 높고(OD260/280 ≈ 1.8-2.0), 내독소 수치가 낮아야 합니다(<0.1 EU/μg).

• 세포 상태 확인: HEK293 세포를 사용할 경우, 대수 증식기이고 낮은 배대(≤30대)의 건강한 세포를 사용해야 합니다. 접합도는 약 85-90% 에서 트랜스펙션하는 것이 이상적입니다.

• 유전자 크기 주의: AAV의 이론적 패키징 한계는 약 4.7kb입니다. 이 크기에 가까운 유전자를 사용할 경우, 비필수 요소를 줄이고 플라스미드 비율을 특별히 최적화해야 합니다.

• 엄격한 품질 관리: 생산된 AAV의 품질을 평가하기 위해 qPCR/ddPCR을 통한 역가 측정, 투과전자현미경(TEM) 또는 ELISA를 통한 공장율 분석, SDS-PAGE를 통한 캡시드 단백질(VP1/VP2/VP3) 무결성 확인이 필수적입니다.

 결론

요약하자면, AAV 패키징 효율을 높이는 것은 단일 방법이 아닌 플라스미드 구성, 생산 공정, 세포 및 캡시드 공학을 포함한 다각도의 접근이 필요합니다. 특정 연구 목적에 가장 적합한 조합은 사전 실험을 통해 확인해야 합니다.