AAV 바이러스 패키징 과정의 흔한 문제와 해결 방안

1. 생산량(역가) 저하

가능한 원인

• 목표 유전자나 벡터 디자인이 세포에 독성을 유발하여 패키징 효율이 낮아짐

• 삽입된 DNA 조각이 너무 길어 AAV 적재 한도를 초과

• DNA 구조가 불안정하거나 불완전함

해결 방안

• 설계 단계에서 삽입 서열의 크기를 최적화하고 불필요한 서열 제거

• 적절한 프로모터/조절 요소 조합 고려

2. 감염 효율 저하

가능한 원인

• 혈청형 선택이 목표 세포/조직과 맞지 않음

• 기능성 입자 비율이 낮고 빈 캡시드가 많음

• 실험에 사용된 세포의 상태가 좋지 않거나 저항성 존재

해결 방안

• 목표 조직/세포에 맞는 혈청형을 문헌 검토를 통해 선택

• 생산 기관에 기능성 검증 결과(유전자 역가뿐 아니라 생물학적 활성 보고서) 요청

• 세포 상태와 대조군 조건 확인

3. 제품 순도 또는 안전성 문제

가능한 원인

• 생산/정제 과정이 불완전하여 불순물(단백질, 핵산, 엔도톡신 등) 잔류

• 운송·보관 조건 부적절로 입자 분해 또는 오염 발생

해결 방안

• 공급 기관에 무균·엔도톡신·잔류 단백질 QC 보고서 요청

• 운송 및 저장 조건(온도, 시간) 확인

4. 게놈 불완전 또는 절단

가능한 원인

• 삽입 서열이 반복·고 GC 영역을 포함하여 재조합이나 손실 발생

• AAV 적재 한도(약 4.7 kb) 초과

해결 방안

• 설계 단계에서 게놈 크기 제한 고려

• Southern blot, NGS 등과 같은 게놈 완전성 검사 요약 보고서 요청

5. 배치 간 차이 큼

가능한 원인

• 생산 공정의 배치별 차이

• 시약, 플라스미드, 세포 상태의 차이

해결 방안

• 공급 기관 QC 표준화 여부 확인

• 내부 대조군을 구축하여 특정 배치에만 의존하지 않도록 함

6. 면역 반응 또는 중화항체 문제

가능한 원인

• 실험 동물 또는 대상이 기존에 면역 기억을 가짐

• 특정 AAV 혈청형이 면역 반응을 쉽게 유발

해결 방안

• 연구 설계 시 AAV와 면역 시스템의 상호작용 관련 종설 참고

흔한 문제: 생산량 저하, 감염 효율 저하, 순도 문제, 게놈 불완전, 배치 간 차이, 면역 반응

해결 방안: 벡터 디자인 최적화, 적절한 혈청형 선택, QC 보고서 확인, 운송·보관 조건 관리, 면역학적 한계 고려