AAV 포장 후 바이러스는 어떻게 저장하고 안정화시킬 수 있나요?

1. 온도 제어:

• 저온 저장:

  • AAV 바이러스는 일반적으로 -80°C 또는 그 이하의 온도에서 저장됩니다. 저온은 바이러스 입자의 안정성을 유지하고, 바이러스의 분해나 비활성화를 방지하는 데 도움이 됩니다.

  • -20°C는 단기 저장에 적합할 수 있지만, 장기 저장에는 -80°C가 가장 적합합니다.

• 동결건조 저장:

  • 장기 보관 또는 운반이 필요한 경우, 동결건조(lyophilization) 기술을 사용할 수 있습니다. 동결건조 과정은 바이러스 입자의 수분을 제거하여 상온에서도 안정적으로 저장할 수 있게 합니다.

  • 동결건조된 AAV 바이러스는 건조하고 서늘하며 빛을 피한 장소에 보관해야 하며, 재용해할 때 조심스럽게 다뤄야 바이러스가 비활성화되지 않습니다.

2. 동결 보호제 사용:

• 동결 보호제 첨가:

  • AAV 바이러스를 저장하기 전, 글리세롤(glycerol), 디메틸설폭사이드(DMSO) 등 동결 보호제를 첨가합니다. 이러한 동결 보호제는 바이러스 입자의 구조를 유지하고 동결/융해 과정에서의 손상을 줄여줍니다.

  • 보통, 동결 보호제 농도는 5% – 10% 범위에서 조절됩니다.

3. 반복 동결 및 해동 방지:

• 동결-해동 반복:

  • 반복적인 동결-해동은 AAV 바이러스 입자에 손상을 줄 수 있으며, 전염 효율이 떨어질 수 있습니다. 따라서 동결-해동을 피하고, 바이러스 샘플을 작은 용기에 나누어 저장하여 반복적인 동결 해동을 방지하는 것이 좋습니다.

4. 액체 상태와 동결건조 샘플의 차이:

• 액체 저장:

  • AAV 바이러스가 액체 상태로 저장될 때는 적절한 저온에서 보관하며, 바이러스 샘플의 pH를 안정된 범위(보통 pH 7.0 – 8.0)로 유지해야 합니다.

• 동결건조 바이러스 저장:

  • 동결건조된 AAV 바이러스는 저장 시 온도와 습도를 조절하여, 고온이나 습기가 많은 환경을 피해야 바이러스 입자가 안정적으로 유지됩니다.

5. 저장 기간과 안정성:

• 단기 저장:

  • 실험실에서 사용할 경우, AAV 바이러스는 -20°C에서 -80°C 사이에서 몇 달 동안 저장할 수 있습니다. 임상 연구에 사용되는 바이러스는 보다 엄격한 안정성 테스트를 거쳐야 하며, 장기 저장 후에도 바이러스의 품질과 기능이 보장되어야 합니다.

• 장기 안정성:

  • 연구에 따르면, AAV 바이러스는 -80°C 또는 그 이하에서 저장할 경우 안정성이 높으며, 올바른 냉동 조건에서는 바이러스를 수개월 또는 수년 동안 보관할 수 있습니다.

• 동결건조 샘플:

  • 동결건조된 AAV 바이러스는 적절한 조건에서 몇 년 동안 보관할 수 있습니다. 동결건조 샘플은 습기, 직사광선, 고온 환경을 피해야 합니다.

6. AAV 바이러스 품질 관리:

• 저장 중 정기적으로 바이러스 농도 검사 및 순도 분석을 수행해야 합니다. 이러한 검사는 바이러스 샘플의 품질과 안정성을 보장하는 데 도움이 됩니다. 예를 들어, qPCR(정량 PCR)을 사용해 AAV 유전자의 수를 측정하고, Western blot을 사용해 단백질 발현 수준을 확인할 수 있습니다.

• 내독소 검사: AAV 바이러스의 내독소 수치도 주기적으로 검사해야 하며, 임상 응용에 적합한 안전 기준을 충족해야 합니다.

7. 저장 용기 선택:

• 저온 냉동 튜브:

  • AAV 바이러스를 저장할 때는 무균 냉동 튜브(예: 폴리프로필렌 튜브)를 사용하여 동결-융해 과정에서 튜브가 깨지지 않도록 해야 합니다. 냉동 튜브는 밀폐성이 좋고 바이러스 샘플이 오염되지 않도록 해야 합니다.

• 동결건조 병:

  • 동결건조 샘플의 경우 동결건조 병 또는 밀폐 용기에 보관해야 하며, 이는 수분이 들어가지 않도록 도와줍니다.

AAV 바이러스의 저장과 안정성은 그 효과를 보장하는 데 매우 중요합니다. 저온 저장, 동결 보호제 사용, 반복 동결-해동 방지 등의 방법을 통해 AAV 바이러스가 장기적으로 활성을 유지하고 안전하게 보관될 수 있습니다. 동결건조된 바이러스는 적절한 저장 조건과 품질 관리가 필수적입니다.