AAV는 유전자 Knockout용인가요, Overexpression용인가요?

Q: AAV 바이러스는 일반적으로 유전자 Knockout에 사용되나요, 아니면 Overexpression에 사용되나요?

A: AAV의 가장 일반적인 용도는 유전자 과발현(Overexpression)입니다. Knockdown도 가능하지만, Knockout을 위해서는 일반적으로 CRISPR 시스템과의 병용이 필요합니다.

① AAV의 주요 용도: 유전자 과발현 (가장 일반적)

AAV는 안전성이 높고 장기간 발현이 가능한 유전자 전달 벡터입니다. 세포 내에서 주로 episomal 형태로 존재하여 안정적인 발현이 가능합니다.

주요 활용 분야:

• cDNA 과발현

• GFP, mCherry 등 형광단백질 발현

• 유전자 기능 분석

• 동물 모델 제작

• 유전자 치료 연구

 따라서 연구 및 전임상 분야에서 AAV는 주로 과발현 연구에 사용됩니다.

② AAV를 이용한 유전자 Knockdown

AAV는 다음과 같은 RNA 간섭 요소를 발현시켜 유전자 발현을 억제할 수 있습니다:

• shRNA

• miRNA

• artificial miRNA

특징:

• 장기간 발현 가능

• in vivo 연구에 적합

• 완전 제거가 아닌 발현 억제

③ AAV로 유전자 Knockout이 가능한가요?

AAV 자체는 유전자 편집 기능을 가지고 있지 않습니다.

Knockout을 위해서는 다음과 같은 방법을 사용합니다:

• AAV를 이용한 CRISPR/Cas9 전달

• Cas9 형질전환 동물에 sgRNA를 AAV로 전달

주의사항:

• AAV 패키징 용량: 약 4.7 kb

• SpCas9은 크기가 커서 용량 제한 문제 발생 가능

• SaCas9 또는 분할 Cas9 시스템 사용 가능

AAV 기반 Knockout은 CRISPR 시스템과 함께 사용해야 합니다.