빈 벡터 렌티바이러스 감염 후 도입이 확인되지 않는 이유는 무엇인가요?

Q: 빈 벡터 렌티바이러스 감염 후 도입이 확인되지 않는 이유는 무엇인가요?

A:빈 벡터 렌티바이러스 감염 후 효과가 보이지 않는 경우는 비교적 흔하며, 대부분 바이러스 자체의 문제라기보다는 벡터 특성이나 실험 조건과 관련이 있습니다. 주요 원인은 다음과 같습니다.

1. 빈 벡터에는 시각적 마커가 없음

빈 벡터는 일반적으로 형광 단백질이나 기능 유전자를 포함하지 않기 때문에, 현미경 관찰만으로는 감염 여부를 확인하기 어렵습니다.

권장 사항:

• 항생제 선택(Puromycin 등)을 통한 감염 확인

• 게놈 qPCR을 이용한 바이러스 도입 검증

• 형광 렌티바이러스를 양성 대조군으로 사용

2. 바이러스 역가 부족 또는 활성 저하

반복적인 동결·해동, 장기 보관, 운송 조건 등에 의해 감염 효율이 감소할 수 있습니다.

권장 사항:

• MOI를 2–5배 범위로 단계적으로 증가

• 동결·해동 횟수를 최소화하고 신선한 aliquot 사용

3. 세포 상태가 감염에 부적합

렌티바이러스 감염 효율은 세포 상태에 크게 영향을 받습니다.

주의 사항:

• 세포 밀도가 너무 높거나 낮은 경우

• 로그 성장기가 아닌 경우

• 해동 직후 또는 계대 수가 많은 세포

권장 조건:

• 감염 시 세포 confluency: 30–50%

4.Polybrene 미사용 또는 조건 부적절

Polybrene을 사용하지 않거나 농도가 적절하지 않으면 감염 효율이 크게 저하될 수 있습니다.

권장 조건:

• 일반적인 사용 농도: 5–8 μg/mL

• 민감한 세포는 농도 테스트 권장

5. 세포 유형 자체가 감염이 어려운 경우

1차 세포, 줄기세포, 일부 부유 세포는 렌티바이러스 감염 효율이 낮을 수 있습니다.

권장 사항:

• MOI 증가

• 원심 감염(Spinfection) 적용

• 감염 시간 연장

6. 프로모터 활성 저하

CMV 등 일부 프로모터는 특정 세포 유형에서 발현이 억제될 수 있습니다.

권장 사항:

• 세포 특성에 따라 EF1α, PGK, SFFV 등의 프로모터 선택

요약:

빈 벡터에서 감염 효과가 확인되지 않더라도, 이는 반드시 감염 실패를 의미하지는 않습니다.
적절한 검증 방법을 병행하여 평가하시기 바라며, 추가 문의 사항은 기술 지원팀으로 연락해 주시기 바랍니다.