바이러스 벡터 제작 자주 묻는 질문 (FAQ)

본 페이지에서는

AAV / 렌티바이러스 벡터 제작 과정에서 자주 발생하는 문제와 해결 방법을 안내합니다.

Q1: 바이러스 역가가 낮은 이유는 무엇인가요?

원인

• 플라스미드 순도 부족 (엔도톡신 높음)

• 트랜스펙션 효율 저하

• 유전자 크기 초과

• 세포 상태 불량

해결 방법

• 고순도, 저엔도톡신 플라스미드 사용

• 트랜스펙션 조건 최적화

• 유전자 크기 관리

  • AAV: 4.7 kb 이하 (ITR 포함)

  • 렌티바이러스: 8–9 kb 이하

• 생존율 90% 이상의 로그 성장기 세포 사용

Q2: 감염 후 발현이 없거나 낮은 이유는 무엇인가요?

원인

• 프로모터가 세포에 적합하지 않음

• AAV 혈청형 선택 오류

• MOI 부족

• 유전자 독성 또는 발현 제한

해결 방법

• 세포 특성에 맞는 프로모터 선택 (CMV, EF1α 등)

• 조직·종에 적합한 AAV 혈청형 사용

• MOI 단계별 테스트

• GFP, FLAG 태그로 발현 확인

Q3: 감염 후 세포 사멸이 심합니다

원인

• 바이러스 농도 과다

• 유전자 독성

• 감염 조건 과도

해결 방법

• MOI 감소 또는 분할 감염

• 유도 발현 시스템(Tet-On) 사용

• 감염 시간 단축

• 민감한 세포에는 렌티바이러스 권장

Q4: AAV 공캡시드 비율이 높으면 문제가 되나요?

설명
공캡시드는 유전자를 포함하지 않아 실제 감염 효율을 낮춥니다.

해결 방법

• 플라스미드 비율 최적화

• ITR 서열 완전성 확인

• 밀도구배 원심분리 또는 크로마토그래피 정제

• 검증된 제작 공정의 서비스 선택

Q5: 바이러스 보관 방법은 어떻게 하나요?

• -80°C 장기 보관

• 소량 분주하여 반복 동결·해동 방지

• 사용 시 37°C에서 신속 해동 후 즉시 얼음 보관

Q6: 바이러스 역가 측정 결과가 다른 이유는?

이유

• 측정 방법 차이

  • AAV: vg/mL (qPCR)

  • 렌티바이러스: TU/mL, IFU/mL

권장 사항

• 동일 프로젝트 내 측정 방식 통일

• COA 리포트 확인

Q7: 바이러스 실험 성공률을 높이려면?

• 합리적인 벡터 설계

• 안정적인 제작 공정

• 고품질 바이러스 사용

경험이 풍부한 바이러스 제작 플랫폼 선택이 실험 성공의 핵심입니다.