AAV 삼중 플라스미드 패키징 최적화

Q1: AAV 삼중 플라스미드 패키징 시스템이란 무엇인가요?

AAV 삼중 플라스미드 패키징 시스템은 가장 널리 사용되는 AAV 생산 방법입니다.
일반적으로 HEK293 계열 세포에 아래 3종의 플라스미드를 공동 형질도입하여 AAV를 생산합니다.

1. Transfer 플라스미드

• ITR 및 목적 유전자 발현 카세트 포함

2. Rep/Cap 플라스미드

• AAV 복제 및 캡시드 형성에 필요

3. Helper 플라스미드

• 아데노바이러스 보조 유전자(E2A, E4, VA RNA) 제공

Q2: 세 플라스미드의 비율이 AAV 생산량에 영향을 주나요?

네, 매우 큰 영향을 미칩니다.

일반적인 시작 비율은 1:1:1 (중량비) 이지만,
혈청형 및 벡터 설계에 따라 최적 비율은 달라질 수 있습니다.

자주 사용되는 최적 비율:

• 1 : 1 : 2

• 1 : 2 : 1

• 1 : 1.5 : 1.5

부적절한 비율은 생산량 감소 및 공캡시드 증가를 초래할 수 있습니다.

Q3: Transfer 플라스미드 크기는 패키징에 영향을 주나요?

네. AAV는 유전체 크기에 매우 민감합니다.

ITR 포함 전체 길이 4.7 kb 이하 권장

초과 시:

• 패키징 효율 감소
• 불완전 유전체 증가
• 발현 불안정

Q4: 프로모터가 강할수록 AAV 생산량이 높아지나요?

반드시 그렇지는 않습니다.

강한 프로모터(예: CMV)는
세포 독성을 유발하여 오히려 AAV 생산량을 낮출 수 있습니다.

중간 강도 또는 조직 특이적 프로모터가
더 높은 유효 바이러스 생산으로 이어질 수 있습니다.

Q5: GFP 형광이 강하면 AAV 적정이 높은 건가요?

아닙니다.

• GFP 형광은 발현 지표일 뿐

• AAV 입자 수나 기능적 적정을 직접 반영하지 않습니다

AAV 적정은 qPCR, ddPCR, ELISA 등을 통해 평가해야 합니다.

Q6: 형질도입 조건이 중요한가요?

매우 중요합니다.

주요 요소:

• 세포 상태(70–80% confluency, 마이코플라스마 음성)

• 형질도입 시약(PEI 등)

• DNA:시약 비율

• 형질도입 후 배양 조건

Q7: AAV는 언제 수확하는 것이 가장 좋나요?

일반적으로 형질도입 후 48–72시간입니다.
일부 혈청형에서는 72시간에서 더 높은 수율을 보이기도 합니다.

Q8: 적정이 높은데 전도 효율이 낮은 이유는 무엇인가요?

가능한 원인:

• 공캡시드 비율이 높음

• 유전체 불완전

• 실제 기능적 적정이 낮음

• 혈청형이 표적 세포에 부적합

Q9: 삼중 플라스미드 최적화로 공캡시드를 줄일 수 있나요?

가능합니다.

• 플라스미드 비율 조정

• 형질도입 조건 최적화

• 유전체 크기 조절

은 공캡시드 감소에 도움이 됩니다.

Q10: 자체 AAV 패키징 결과가 불안정할 경우 어떻게 해야 하나요?

AAV 삼중 플라스미드 패키징은
플라스미드 설계, 비율, 형질도입 조건, 배양 및 수확 공정 등
여러 변수가 복합적으로 작용하는 고난도 공정입니다.

재현성 확보나 안정적인 품질 유지가 어려운 경우,
전문적인 AAV 패키징 서비스를 이용하는 것이 효과적인 선택이 될 수 있습니다.

당사는:

• 혈청형별로 최적화된 삼중 플라스미드 패키징 조건

• 표준화된 공정을 통한 높은 배치 간 재현성

• 엄격한 품질 관리 및 적정 분석 시스템

• 연구용부터 전임상 단계까지 대응 가능한 AAV 생산 서비스

를 통해 신뢰할 수 있는 고품질 AAV 공급을 지원하고 있습니다.