GFP 형광 발현이 많으면 AAV 생산량도 높은가요?

답변: 반드시 그렇지는 않습니다.

GFP 형광 강도는 AAV 바이러스의 생산량(바이러스 역가)을 직접적으로 반영하지 않습니다.

왜 GFP 형광이 강해도 AAV 생산량이 높다고 할 수 없나요?

1.GFP는 발현 효율을 나타내는 지표일 뿐, 포장량을 의미하지 않습니다

GFP 형광은 주로 프로모터의 강도, 세포 유형, 감염 효율과 관련이 있으며, 바이러스 유전체 역가(vg/mL)를 정확히 반영하지 않습니다.

2.강한 프로모터는 형광 신호를 과대하게 보이게 할 수 있습니다

CMV, CAG 등 강력한 프로모터를 사용할 경우, 실제 역가가 높지 않더라도 강한 GFP 발현이 관찰될 수 있습니다.

3.빈 캡시드(empty capsid)는 GFP 관찰에 반영되지 않습니다

AAV 제품에는 빈 캡시드 또는 불완전하게 포장된 입자가 포함될 수 있으며, 이는 GFP 발현에는 영향을 주지 않지만 실제 유효 생산량에는 영향을 미칩니다.

GFP 형광이 많을 때 알 수 있는 점은 무엇인가요?

GFP 형광이 확인되면 다음을 의미할 수 있습니다:

• 바이러스가 생물학적 활성을 가지며 세포 감염이 가능함

• 벡터 설계(ITR, 프로모터, 리포터 유전자)에 큰 문제가 없음

• 사용된 AAV 혈청형이 해당 세포에 적합함

단, AAV의 총 생산량이나 역가를 판단하는 기준으로는 사용할 수 없습니다.

AAV 생산량 평가에 권장되는 방법

• qPCR 또는 ddPCR을 통한 바이러스 유전체 역가(vg/mL) 측정

• 필요 시 ELISA를 이용한 캡시드 입자 수 측정

• 정제 방식 및 빈 캡시드 비율을 포함한 종합적 평가

GFP 형광은 발현 여부를 확인하는 지표이며, AAV 생산량 평가는 역가 측정을 통해 이루어져야 합니다.