AAV(아데노연관바이러스) 벡터 제작 서비스 전체 프로세스

1. 사전 상담 및 기술 평가

목적: 프로젝트 성공 가능성 평가 및 리스크 최소화

• 연구 목적 확인 (과발현 / knockdown / CRISPR)

• 적용 환경 (in vivo / in vitro)

• 대상 종 및 표적 조직 확인

• AAV 혈청형 선택 (AAV1–AAV9, PHP.eB, DJ 등)

• 발현 카세트 크기(≤4.7 kb) 검토

산출물: 기술 제안서, 견적, 예상 일정

2. AAV 벡터 설계 및 플라스미드 제작

목적: 패키징에 적합한 고품질 플라스미드 확보

• ITR 구조를 고려한 벡터 설계

• 프로모터–유전자–PolyA 구성 최적화

• 클로닝 및 시퀀싱 검증

• Endotoxin-free 플라스미드 정제

※ 고객 제공 플라스미드의 경우 사전 품질 검사 진행

3. AAV 바이러스 패키징

목적: 안정적이고 효율적인 AAV 생산

• HEK293 / HEK293T 세포 배양

• 3종 플라스미드 공동 형질전환

• 48–72시간 후 바이러스 수확

4. AAV 바이러스 정제

목적: 고순도 AAV 벡터 확보

• Iodixanol 밀도구배 원심분리

• 컬럼 크로마토그래피 정제

• 불순물 및 빈 캡시드 제거

5. 농축 및 버퍼 교환

• 초여과 방식 농축

• 주사용 버퍼(PBS 등)로 교환

• 최종 부피 조절

6. 품질 관리(QC)

목적: 안전성, 재현성, 신뢰성 확보

• 바이러스 역가 측정 (qPCR / ddPCR)

• 캡시드 단백질 분석 (VP1/2/3)

• 무균, 엔도톡신 검사

• 기능 검증 (선택 사항)

7. 분주·보관·납품

• 무균 분주 (저흡착 튜브)

• −80℃ 보관

• 드라이아이스 배송

• QC 리포트(COA) 제공

8. 기술 지원 및 사후 관리

• 감염 조건 및 투여량 최적화

• 발현 문제 발생 시 원인 분석 지원

• 후속 연구 프로젝트 기술 지원