렌티바이러스 패키징 시 세포를 용해하여 바이러스를 방출해야 하나요?

필요하지 않습니다.
일반적인 렌티바이러스(Lentivirus) 패키징 및 수확 과정에서는 세포 용해가 필요하지 않으며, 권장되지도 않습니다.

1.왜 세포 용해가 필요 없을까요?

렌티바이러스는 출아형 바이러스(budding virus)로,
293T와 같은 패키징 세포에서 세포막을 통해 지속적으로 출아되어 배양 상층액으로 방출됩니다.
즉, 바이러스의 대부분은 세포 내가 아니라 배양 상층액에 존재합니다.

👉 세포를 용해할 경우 오히려 다음과 같은 문제가 발생할 수 있습니다:

• 숙주 단백질, DNA, 세포 파편이 대량 방출됨

• 바이러스 독성 증가, 이후 감염 효율 저하

• 바이러스 순도 저하 및 역가 측정에 간섭

• 기능성 바이러스 수율이 유의미하게 증가하지 않음

2.권장되는 표준 렌티바이러스 수확 절차

1. 293T 패키징 세포에 질 플라스미드 시스템(3-플라스미드 또는 4-플라스미드)으로 공동 전이

2. 전이 후 48시간 및 72시간에 배양 상층액 수확

3. 3000 g, 10분 원심분리로 세포 파편 제거

4. 0.45 μm 필터로 여과

5. 직접 사용하거나 PEG 침전 또는 초원심분리로 농축

📌 전 과정에서 세포 용해는 수행하지 않음

3.그렇다면 언제 ‘세포 용해’가 언급될까요?

다음과 같은 경우에서 혼동이 발생할 수 있습니다:

1️⃣ AAV(아데노부속바이러스)

AAV는 대부분 세포 내에 머무르므로, 바이러스 방출을 위해 세포 용해가 필수적입니다.

AAV는 세포 용해 필요 / 렌티바이러스는 불필요

2️⃣ 바이러스 관련 분석 실험

예:

• Gag, p24 단백질을 검출하기 위한 Western blot

• 패키징 성공 여부 확인 목적
  ⚠️ 바이러스 수확 목적이 아님

3️⃣ 비표준 또는 잘못된 조작

세포 용해를 통해 렌티바이러스 역가를 높일 수 있다는 것은 일반적인 오해입니다.