렌티바이러스(Lentivirus) 패키징 자주 묻는 질문 Q&A

1. 렌티바이러스 패키징은 보통 얼마나 걸리나요?

일반적으로 48–72시간 후에 바이러스 생성이 뚜렷하게 나타나며, 72시간 시점에서 가장 높은 역가에 도달합니다.
최대 96시간까지 수거하는 것이 일반적입니다.

2. 3-플라스미드 시스템과 4-플라스미드 시스템의 차이는 무엇인가요?

• 3-플라스미드 시스템: Transfer plasmid + psPAX2(gag/pol/rev) + pMD2.G(VSV-G)

• 4-플라스미드 시스템: 패키징 요소를 더 세분화하여 안전성이 향상되고 역가도 다소 높은 편입니다.

결론: 4-플라스미드 시스템이 안전성↑, 역가↑ 경향을 보입니다.

3. 목적 유전자는 최대 어느 정도 크기까지 패키징할 수 있나요?

렌티바이러스의 실질적인 패키징 한계는 약 8–9 kb(백본 포함) 입니다.
9 kb 이상이면 역가가 급격히 감소하거나 바이러스 안정성이 떨어질 수 있습니다.

4. 목적 유전자가 너무 클 때 해결 방법은?

• Dual-vector 시스템(Split LV) 사용

• 벡터 백본 최소화

• AAV, PiggyBac 등 대체 전달 시스템 고려

5. 트랜스펙션 효율이 낮으면 역가에도 영향을 주나요?

영향 있습니다. HEK293T 세포의 상태, DNA 품질, 트랜스펙션 조건은 역가 결정의 핵심 요소입니다.

6. 배지가 노랗게 변하는 이유는?

대부분 세포 밀도 증가 또는 대사 활성 증가로 pH가 낮아지기 때문입니다.
너무 빨리 변색된다면(24h 이내):

• 트랜스펙션 시약 독성

• 293T 세포 상태 불량

• 혈청 품질 문제
  등을 확인해야 합니다.

7. 수거한 바이러스 상등액을 필터링해야 하나요?

권장됩니다. 0.45 μm 필터로 세포 잔여물을 제거하면 감염 안정성 향상에 도움이 됩니다.

8. 바이러스 보관 방법 및 동결·해동 가능 횟수는?

• -80°C 보관 시 수개월 안정적

• 동결·해동은 최소화해야 하며, 1회 해동 시 역가가 20–50% 감소할 수 있습니다.
  → 소분 보관 권장

9. 역가 측정 방법은 무엇이 있나요?

• qPCR/RT-qPCR: 바이러스 게놈 수 측정

• 기능적 역가(TU): 감염 후 양성률 기반 계산

• p24 ELISA: 캡시드 단백질 측정(참고용)

10. 감염 후 언제 형광을 볼 수 있나요?

일반적으로 48–72시간 후 형광이 나타납니다.
느리다면:

• MOI가 낮음

• 형광 단백질 발현 약함

• 세포 상태 불량

• 감염 시 Polybrene 미사용
  등이 원인일 수 있습니다.

11. 바이러스 역가가 낮은 이유는?

주요 원인:

• HEK293T 세포 상태 불량

• DNA 품질 문제(내독소 잔류 등)

• 목적 유전자 크기 과대

• 벡터 구성 오류(예: LTR 문제)

• 트랜스펙션 조건 부적합

• 상등액 수거 시점 부적절

• 원심분리/여과 과정에서 손실

12. 패키징 과정에서 배지를 교체해야 하나요?

트랜스펙션 12–16시간 후 신선한 완전배지로 교체하면 독성을 줄이고 역가를 높일 수 있습니다.

13. 렌티바이러스는 안전한가요? 실험자가 감염될 수 있나요?

연구용 렌티바이러스(2·3·4세대)는 복제 능력이 제거되어 있어 일반적으로 감염 위험이 매우 낮습니다.
바늘 사고 등 노출 시:

• 즉시 세척

• 70% 에탄올 소독

• 실험실 규정에 따라 보고 및 관찰
  심각한 사례는 거의 보고되지 않습니다.