렌티바이러스(Lentivirus)가 세포를 감염한 후 형광 단백질(또는 목표 유전자)의 발현이 나타나는 시점은 바이러스 역가, 세포 종류, 프로모터 강도, 발현 단백질의 안정성 등에 따라 달라집니다. 일반적인 기준은 다음과 같습니다.
1. 초기 형광 발현: 24–48시간
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감염 후 24–48시간 사이에 약한 형광 신호가 보이기 시작할 수 있습니다.
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이 단계는 비통합 발현(episomal expression) 으로, 신호가 약하고 안정적이지 않습니다.
2. 안정적이고 강한 형광 발현: 72–96시간
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바이러스 유전체가 세포 유전체에 통합되면서 발현이 점차 안정화됩니다.
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보통 감염 3–4일(72–96시간) 후부터 강하고 안정적인 형광을 관찰할 수 있습니다.
3. 완전한 안정화: 5–7일
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세포가 여러 번 분열하고 안정적 발현 세포주가 형성되면 형광 신호가 더욱 안정됩니다.
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항생제 선별(puromycin 등) 을 하는 경우, 일반적으로 5–7일 후 효과적으로 확인됩니다.
형광 발현 시점에 영향을 주는 요인
| 요인 | 영향 |
| MOI (Multiplicity of Infection) | MOI가 높을수록 형광이 더 빨리 나타남 |
| 세포 종류 | 분열 속도가 빠른 세포일수록 통합 발현이 빨리 나타남 |
| 프로모터 강도 | EF1α, CMV, SFFV > PGK, UbC |
| 형광 단백질 종류 | GFP가 mCherry/mKate보다 더 빨리, 더 선명하게 보이는 경향 |
| 감염 효율 | Polybrene을 사용하면 감염 및 형광 발현이 빨라짐 |
실험 팁
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감염 후 48시간에 형광이 약하게 보이거나 보이지 않더라도 너무 일찍 판단하지 않아도 됩니다.
72–96시간까지 관찰해 보세요. -
안정적 세포주를 만들 계획이라면 감염 72시간 후 항생제 선별을 시작하는 것이 좋습니다.
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