AAV 벡터용 플라스미드 및 헬퍼 플라스미드 패키징

AAV(아데노-관련 바이러스, Adeno-Associated Virus) 벡터를 생산할 때는 보통 3-플라스미드 시스템(three-plasmid system)을 사용합니다. 각 플라스미드는 서로 다른 역할을 담당해 바이러스 입자가 형성됩니다.

1. 전사 벡터 (Transfer Vector, pAAV-Transfer)

• 구성 요소

  • [ITR] – 프로모터 – 외래 유전자 – polyA – [ITR]

• 역할

  • 연구자가 발현시키고자 하는 유전자(외래 유전자) 를 포함

  • ITR(Inverted Terminal Repeats)이 AAV 게놈 복제와 패키징에 필수

2. 패키징 플라스미드 (Packaging Plasmid, pAAV-RepCap)

• 구성 요소

  • Rep 유전자: AAV DNA 복제와 게놈 포장에 필요

  • Cap 유전자: VP1, VP2, VP3 캡시드 단백질을 암호화 → 혈청형(serotype)과 조직 친화성(tropism) 결정

• 역할

  • 바이러스의 껍질(캡시드)과 복제 단백질을 제공하지만 ITR이 없어 스스로 포장되지 않음

3. 헬퍼 플라스미드 (Helper Plasmid, pHelper)

• 구성 요소

  • 아데노바이러스(adenovirus) 유래 유전자: E2A, E4, VA RNA 등

• 역할

  • AAV가 복제·조립되기 위해 필요한 보조因子(helper function) 제공

  • 실제로는 아데노바이러스 감염을 흉내내어 AAV 생산을 도와줌

AAV 생산의 전형적인 3-플라스미드 시스템

• pAAV-Transfer → 외래 유전자 (ITR 포함)

• pAAV-RepCap → Rep/Cap 단백질 (혈청형 결정)

• pHelper → 아데노바이러스 보조因子 제공

이 세 가지를 HEK293T 세포 등에 동시 트랜스펙션(transfection) 하면 AAV 벡터 입자가 세포 내에서 조립되어 분비됩니다.